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Fluxomique

Dans le cadre d’une initiative conjointe entre les laboratoires RESTORE, CRCT et la plateforme MetaToul, le CERT abrite un dispositif de fluxomique in vivo qui inclut :
- deux modules permettant la réalisation d’expériences de traçage isotopique (isotopes stables : 13C, 15N, etc) in vivo ou in vitro
- les équipements nécessaires à la collecte des échantillons et à l’extraction des métabolites
- une chambre de culture en pression en oxygène contrôlée permettant d’appréhender l’effet des variations de la pression partielle en oxygène sur le métabolisme
- un plateau de respirométrie pour mesurer les flux de consommation d’oxygène
Les analyses du métabolome, du lipidome et du marquage isotopique sont réalisées sur la plateforme MetaToul, qui dispose d’un parc instrumental (spectrométrie de masse, RMN) et d’une expertise unique en France dans ce domaine. L’ensemble du dispositif et des expertises associées représente une configuration unique en France pour des études approfondies de la dynamique métabolique à différents niveaux d’échelle (de la cellule à l’organisme entier).

Module de fluxomique in vivo
Il contient les infrastructures et les appareils nécessaires pour réaliser l’intégralité d’une étude de traçage isotopique in vivo sur souris:
- Etablissement Utilisateur d’animaux à des fins scientifiques agréé par la DDPP
- Tables d’anesthésie gazeuse pour la cathétérisation des souris
- Dispositif de perfusion de substrats marqués au 13C (ou autres isotopes stables) sur souris vigiles (pousse-seringues, portiques, swivels)
- Prélèvement et préparation des tissus, préparation des échantillons pour l’analyse.

Module de fluxomique in vitro
Il dispose des équipements nécessaires à la réalisation d’une étude de traçage isotopique in vitro dans sa globalité : culture cellulaire sous atmosphère contrôlée en oxygène (cf culture sous atmosphère contrôlée en oxygène), expériences de marquage avec des métabolites marqués au 13C (ou autres isotopes stables), échantillonnage et extraction des métabolites internes (endo-métabolome) ou externes (exo-métabolome):
- Enceinte à une atmosphère entièrement contrôlée en oxygène (X-Vivo, Biospherix)
- Divers équipements pour l’extraction de l’endo- et de l’exo-métabolome
- Système de quenching (blocage immédiat) du métabolisme in vitro

Oxygraphes
Les oxygraphes de type Oroboros présents sur le CERT sont des instruments très sensibles grâce à leurs cuves hermétiques et leurs sondes de Clark. Ils permettent d’étudier l’activité mitochondriale sur tissus (homogénats, perméabilisés), cellules et mitochondries isolées grâce à l’utilisation de différents substrats et drogues. Les oxygraphes de type Oroboros ne sont pas limités en nombre d’injection par expérience ce qui permet une étude plus précise de l’activité mitochondriale :
2 oxygraphes Oroboros
2 cuves indépendantes par oxygraphes
Métabolisme, adipocytes, métabolomique, fluxomique, traçage isotopique in vitro/in vivo, culture cellulaire en hypoxie, activité mitochondriale

- assure le conseil dans l’élaboration des manipulations,
- forme les utilisateurs,
- assiste les utilisateurs dans l’analyse et l’interprétation de leurs résultats,
- accompagne les utilisateurs dans la mise en place de projet de recherche et développement, sous forme de collaboration.