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Cytométrie

Le plateau permet le phénotypage des cellules par la détection et l’identification de molécules membranaires et intracellulaires. Afin de purifier une sous-population cellulaire, nous réalisons également des tris cellulaires à haut débit, reposant sur des analyses cellulaires multi-paramétriques. Ces sous-populations pourront ensuite être étudiées pour différents paramètres (transcriptome, protéome, transfert in vivo…).

Le plateau de cytométrie RESTORE, rattaché à la Plateforme Toulouse Réseau Imagerie, est certifié Iso 9001 version 2015. Le plateau dispose d’un trieur de cellules, de deux analyseurs et d’un cytomètre en image, associé à une forte expertise sur des approches concernant les cellules issues de tissus solides (tissus adipeux, muscles, gencives…). La totalité des appareils est intégrée dans une zone de confinement L2.

L’utilisation des appareils du plateau est ouverte aux équipes de recherche d’établissement public et privés, sous réserve d’acceptation des projets par le responsable.

expertises

La cytométrie en flux est une technique de caractérisation individuelle, quantitative et qualitative de particules en suspension dans un flux.

Fortessa X20 (BD biosciences)

Le Fortessa X20 est équipé de 5 lasers : 488nm blue, 405nm violet, 355nm UV, 640nm red, 561nm yellow-green, pouvant lire 19 paramètres. Le Fortessa présent sur la plateforme est également équipé d’un passeur de plaques 96 puits. Le plateau est équipé des logiciels d’analyses DIVA, Flowlogic et Kaluza, utilisables sur place sous conditions de réservation.

MACSQuant 10 (Miltenyi)

Le MACSQuant est équipé de 3 lasers : 405nm, 488nm et 640nm, pouvant ainsi lire 10 paramètres. Ce cytomètre est également équipé d’un passeur de plaque, d’un module de marquage et de dilution automatique. Il permet de standardiser des expériences.

Le tri de cellules par cytométrie en flux permet d'isoler et de récupérer une ou plusieurs sous-populations cellulaires selon des critères de taille, de granulorité et de fluorescence. Nous sommes par exemple capables de trier des cellules représentant 0.1% de la fraction stromale vasculaire du tissu adipeux.

ARIA FUSION
ARIA FUSION

ARIA FUSION

Le trieur présent sur le plateau, sous ambiance stérile, est un ARIA Fusion (BD Biosciences) équipé de 4 lasers : 561nm yellow-green, 407nm violet, 633nm red, 488nm blue, pouvant lire 18 paramètres.

Le trieur présent sur le plateau est équipé des accessoires suivant :

  • tri en 4 voies
  • tri en tubes de 1.5ml, 2ml, 5ml, 15ml
  • buse de 70µm, 85µm, 100µm
  • module de réfrigération en entrée et en sortie de tri.

Les tris sont assurés par le personnel du plateau sous forme de prestation de service à la demande des équipes de recherche et après acceptation par le responsable du plateau.

L'imagerie en flux est une technologie qui permet de bénéficier grâce à un seul et même instrument de la puissance visuelle de la microscopie et de la rigueur statistique associée à la cytométrie en flux.

Image Stream X
Image Stream X

Image Stream X

Les applications spécifiques à l’Image Stream X sont multiples, nous pouvons notamment citer :

  • l’analyse de morphologie,
  • l’internalisation,
  • la signalisation cellulaire et translocation moléculaire,
  • la co-localisation, interactions cellulaires, cycle cellulaire, apoptose,
  • le comptage de spots,
  • l’autophagie et la mort cellulaire.

Le plateau dispose d’un cytomètre en image : Image Stream X Mark II (Merck-Luminex). Cet appareil est équipé de 3 objectifs (20x, 40x et 60x, de 3 lasers (405nm, 488nm et 642nm) et d’une caméra et peut donc lire 6 paramètres simultanément.

Les fichiers d’images constitués de dizaines de milliers d’images de cellules peuvent être analysés de manière routinière en utilisant le logiciel IDEAS : analyse jusqu’à 500 paramètres morphométriques et photométriques pour chaque image de cellule utilisant des algorithmes brevetés. Le logiciel est présent sur le plateau est utilisable sous conditions de réservation.

Les acquisitions sont assurées par le personnel du plateau sous forme de “prestation de service” à la demande des équipes de recherche et après acceptation par le responsable du plateau. Les analyses peuvent être réalisées avec l’aide ou sous la supervision du personnel du plateau, sous forme de prestation et service ou de collaboration.

CONTACT

Marie-Laure Renoud 2

Marie-Laure Renoud

Ingénieur

L’ingénieur de la plateforme évalue la demande de l’utilisateur et propose la solution la plus adaptée à ses besoins en :

  • assurant le conseil dans l’élaboration des panels multi-couleurs,
  • assurant la formation des utilisateurs,
  • assistant les utilisateurs dans l’analyse et l’interprétation de leurs résultats,
  • accompagnant les utilisateurs dans la mise en place de projet de recherche et développement, sous forme de collaboration.

Pour les utilisateurs réguliers : Réservation directe